SPARC Plasmide Double Nickase (m): sc-423101-NIC

Sparc codifica SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine), una glicoproteina matricellulare che modula l’assemblaggio della matrice extracellulare e le interazioni cellula–matrice, più che fungere da componente strutturale della ECM. Nei tessuti murini, SPARC influenza la fibrillogenesi del collagene, la dinamica delle adesioni focali e la biodisponibilità dei fattori di crescita, integrandosi con vie che regolano migrazione cellulare, proliferazione e rimodellamento tissutale. L’attività di SPARC è spesso collegata alla riparazione delle ferite, a contesti di segnalazione angiogenica e a programmi di rimodellamento fibrotico attraverso effetti sull’organizzazione dello stroma e sulla rigidità della matrice. Un’espressione alterata di SPARC è stata associata a cambiamenti nel comportamento del microambiente tumorale, nel rimodellamento infiammatorio e nei fenotipi di fibrosi d’organo in modelli sperimentali, rendendolo un nodo utile per studiare i meccanismi di malattia guidati dalla ECM.

SPARC Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sparc nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sparc. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sparc. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sparc interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.