Sp1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423094-ACT

Sp1 murino (Specificity protein 1) è un fattore di trascrizione ubiquitariamente espresso con dita di zinco che si lega a elementi promotori ricchi in GC per regolare l’espressione genica basale e inducibile. Sp1 integra segnali provenienti dalle vie MAPK/ERK, PI3K/AKT e dallo stress ossidativo per coordinare programmi trascrizionali che controllano la progressione del ciclo cellulare, l’accessibilità della cromatina, le risposte al danno del DNA e l’apoptosi. Grazie all’ampia occupazione dei promotori e alle interazioni con co-attivatori e co-repressori, Sp1 influenza processi quali la differenziazione e l’adattamento metabolico. Un’attività deregolata di Sp1 è stata collegata ad alterazioni della segnalazione infiammatoria, all’espressione genica associata alla fibrosi e a reti trascrizionali oncogeniche, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici del controllo trascrizionale in contesti rilevanti per la malattia.

Sp1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sp1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sp1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sp1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sp1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sp1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sp1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sp1 nelle cellule tumorali con espressione di Sp1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.