SMEK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-412572-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SMEK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SMEK1 Double Nickase Plasmid (h) e il SMEK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PPP4R3A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SMEK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412572-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SMEK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412572-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP4R3A codifica SMEK1, una subunità regolatoria della fosfatasi proteica 4 che contribuisce a indirizzare l’attività catalitica di PP4 verso specifici substrati e compartimenti subcellulari. SMEK1 partecipa al controllo della progressione del ciclo cellulare dipendente dalla fosforilazione, alle risposte al danno al DNA e alla segnalazione adattativa allo stress modulando eventi di defosforilazione che modellano la cromatina e gli output dei checkpoint. Attraverso queste funzioni, PPP4R3A è rilevante per i meccanismi che influenzano la stabilità del genoma e i programmi proliferativi comunemente alterati nella biologia del cancro. Una regolazione della fosfatasi legata a SMEK1 alterata è stata studiata anche in contesti di differenziamento e omeostasi tissutale, in cui la fedeltà della segnalazione incide su fenotipi cellulari associati a malattia.
SMEK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PPP4R3A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PPP4R3A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PPP4R3A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PPP4R3A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.