Plásmido CRISPR de Activación (h) SLK: sc-406490-ACT

La SLK humana (quinasa tipo STE20) codifica una quinasa de serina/treonina implicada en la remodelación del citoesqueleto, el recambio de las adhesiones focales y la regulación de la motilidad y la polaridad celular. SLK participa en redes de señalización vinculadas a cascadas de quinasas tipo MAPK y a vías sensibles al estrés que coordinan la dinámica de la actina con la progresión del ciclo celular y la apoptosis. A través de sus efectos sobre la señalización dependiente de la adhesión y la arquitectura tisular, la actividad alterada de SLK se ha asociado con fenotipos relevantes para la invasión de células tumorales, la integridad epitelial y anomalías del desarrollo. Por ello, SLK se estudia con frecuencia en modelos de migración, morfogénesis y comunicación cruzada de señalización que acoplan señales mecánicas a programas transcripcionales.

SLK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLK en células tumorales con expresión de SLK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.