Slfn11 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401137-LAC

SLFN11 umano codifica Schlafen family member 11 (Slfn11), un fattore associato alla risposta al danno al DNA che influenza la tolleranza allo stress replicativo e il destino cellulare in seguito a un insulto genotossico. SLFN11 è collegato alla regolazione delle forcelle di replicazione bloccate, ai conflitti tra trascrizione e replicazione e alla segnalazione dei checkpoint, integrandosi con vie che modellano la progressione della fase S e l’integrità del genoma. Attraverso effetti su processi associati alla cromatina e su programmi trascrizionali responsivi allo stress, SLFN11 può modulare la sensibilità cellulare ad agenti che inducono lesioni del DNA. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SLFN11 sono state studiate nel contesto della biologia tumorale e dei meccanismi alla base di fenotipi di resistenza in modelli di ricerca mirati al danno al DNA.

Le particelle di attivazione lentivirale Slfn11 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLFN11 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Slfn11 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLFN11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Slfn11. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLFN11 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.