Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Sigma Receptor Plasmide Double Nickase (m): sc-422068-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sigma Receptor Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Sigma Receptor Double Nickase Plasmid (m) e il Sigma Receptor Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sigmar1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sigma Receptor Antibody (B-5): sc-137075
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sigma Receptor Plasmide Double Nickase (m) | sc-422068-NIC | 20 µg | $410.00 |
Sigmar1 codifica per il recettore sigma 1 (SIGMAR1), uno chaperone di membrana del reticolo endoplasmatico, arricchito nelle membrane del RE associate ai mitocondri, che modula lo scambio di Ca2+, la segnalazione dello stress del RE e la proteostasi. Nelle cellule murine, SIGMAR1 influenza la bioenergetica mitocondriale e le risposte allo stress ossidativo tramite il suo accoppiamento ai flussi di calcio dipendenti da IP3R e ai percorsi adattativi della risposta alle proteine non correttamente ripiegate (unfolded protein response, UPR). La proteina interagisce anche con il metabolismo e il traffico lipidico, modellando l’organizzazione dei microdomini di membrana e la segnalazione recettoriale. Un’attività deregolata di SIGMAR1 è stata collegata in letteratura a neurodegenerazione, dolore neuropatico e fenotipi di stress metabolico, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici dell’omeostasi cellulare.
Sigma Receptor Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sigmar1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sigmar1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sigmar1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sigmar1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.