Sg II Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402906-ACT

SCG2 codifica la secretogranina II (Sg II), un membro della famiglia delle granine che si localizza nei granuli secretori a nucleo denso nelle cellule neuroendocrine e nei neuroni e supporta l’esocitosi regolata. La processazione proteolitica di Sg II genera peptidi bioattivi come la secretoneurina, che modulano la chemiotassi, la crescita dei neuriti e la dinamica della via secretoria, collegando SCG2 alla biogenesi delle vescicole, all’acidificazione dei granuli e alla secrezione accoppiata allo stimolo. Attraverso queste funzioni, l’attività di SCG2 interseca le reti di segnalazione neuroendocrina e i percorsi di traffico delle cellule infiammatorie. Alterazioni dell’espressione di SCG2 e dei profili dei peptidi derivati dalle granine sono state riportate in contesti che includono la biologia dei tumori neuroendocrini e disfunzioni secretorie associate a malattie neurologiche e metaboliche, rendendolo un marcatore utile e un nodo meccanicistico per studi incentrati sulla secrezione.

Sg II Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SCG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sg II Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SCG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SCG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sg II. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SCG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sg II nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sg II nelle cellule tumorali con espressione di SCG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.