SEMA5A Plasmide Double Nickase (m): sc-422885-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SEMA5A Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SEMA5A Double Nickase Plasmid (m) e il SEMA5A Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sema5a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SEMA5A Plasmide Double Nickase (m) | sc-422885-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEMA5A Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422885-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene Sema5a del topo codifica il segnale guida transmembrana SEMA5A, un membro della famiglia delle semaforine che modula la navigazione assonale, il patterning dendritico e la motilità cellulare tramite interazioni recettoriali che influenzano il rimodellamento del citoscheletro e le dinamiche di adesione. La segnalazione di SEMA5A si integra con vie che controllano la guida del cono di crescita e le interazioni cellula–cellula/matrice extracellulare (ECM), contribuendo alla formazione dei circuiti neurali e all’organizzazione dei tessuti. Alterazioni dell’espressione o della funzione di Sema5a sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neurocomportamentali, e la deregolazione della segnalazione delle semaforine è studiata anche in contesti di programmi aberranti di migrazione e invasione. Queste caratteristiche rendono Sema5a un bersaglio utile per analizzare i meccanismi del cablaggio durante lo sviluppo, della connettività sinaptica e della regolazione del movimento cellulare mediata dalle semaforine.
SEMA5A Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sema5a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sema5a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sema5a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sema5a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.