RecQL1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402845-ACT

Il gene umano **RECQL** codifica l’elicasi del DNA dipendente da ATP **RecQL1**, un membro della famiglia RecQ che tutela l’integrità del genoma durante la replicazione e la riparazione del DNA. RecQL1 partecipa al riavvio delle forcelle di replicazione, alla risoluzione di strutture secondarie del DNA e alla soppressione di ricombinazioni aberranti, collegandosi così alle risposte allo stress replicativo e al mantenimento della stabilità cromosomica. La sua attività interagisce con le principali vie di risposta al danno al DNA, inclusa la ricombinazione omologa e la riparazione coordinata alle forcelle bloccate. Un’alterazione della funzione di **RECQL**/delle elicasi RecQ è associata a un aumento dell’instabilità genomica, una caratteristica rilevante per studi meccanicistici della biologia tumorale e per disordini ereditari della manutenzione del genoma.

RecQL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RECQL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RecQL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RECQL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RECQL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RecQL1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RECQL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RecQL1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RecQL1 nelle cellule tumorali con espressione di RECQL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.