RBM15 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417289-ACT

RBM15 (RNA binding motif protein 15) è un fattore nucleare legante l’RNA che regola l’espressione genica controllando la maturazione del pre-mRNA e il metabolismo dell’mRNA. È implicato nei programmi di differenziazione ematopoietica e partecipa a reti trascrizionali e post-trascrizionali, incluse interazioni con la macchina epitranscrittomica che influenza le decisioni sul destino dell’RNA. Un’attività dis-regolata di RBM15 è stata associata ad alterazioni dell’impegno di linea e a fenotipi proliferativi, e riarrangiamenti del gene RBM15 sono stati riportati in contesti di neoplasie ematologiche, a supporto della sua rilevanza nello studio dei circuiti trascrizionali oncogenici e delle vie regolatorie dell’RNA.

RBM15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RBM15 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RBM15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RBM15 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RBM15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RBM15. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RBM15 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RBM15 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RBM15 nelle cellule tumorali con espressione di RBM15 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.