Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Rap1GAP Double Nickase Plasmid (h): sc-403721-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rap1GAP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rap1GAP Double-Nickase-Plasmid (h) und Rap1GAP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAP1GAP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rap1GAP: sc-166586
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rap1GAP Double Nickase Plasmid (h) | sc-403721-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rap1GAP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403721-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAP1GAP kodiert das Rap1‑GTPase-aktivierende Protein (Rap1GAP), einen negativen Regulator der kleinen GTPase Rap1, der die GTP-Hydrolyse beschleunigt und dadurch die Rap1-Signalübertragung begrenzt. Durch die Modulation Rap1‑abhängiger Signalwege, die Integrinaktivierung, die Dynamik von Zell-Zell-Kontakten und den Umbau des Aktinzytoskeletts steuern, beeinflusst Rap1GAP Adhäsion, Migration und polarisiertes Zellverhalten. Veränderte RAP1GAP-Expression oder -Aktivität wurde in verschiedenen Krankheitskontexten beschrieben, in denen eine fehlregulierte Rap1-Signalisierung MAPK/ERK- und PI3K-assoziierte Netzwerke stören und Interaktionen mit der extrazellulären Matrix umgestalten kann. Als „Signalbremse“ an der Schnittstelle zwischen Membranrezeptoren und nachgeschalteten GTPase-Schaltkreisen wird RAP1GAP häufig untersucht, um in Modellsystemen Mechanismen der Invasion, Barrierefunktion und metastasenähnlicher Phänotypen aufzuklären.
Rap1GAP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAP1GAP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAP1GAP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAP1GAP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAP1GAP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.