Rap1GAP Plasmide Double Nickase (h): sc-403721-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rap1GAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rap1GAP Double Nickase Plasmid (h) e il Rap1GAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAP1GAP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rap1GAP Antibody (D-9): sc-166586
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rap1GAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-403721-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rap1GAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403721-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAP1GAP codifica la proteina attivatrice della GTPasi Rap1 (Rap1GAP), un regolatore negativo della piccola GTPasi Rap1 che accelera l’idrolisi del GTP per limitare la segnalazione di Rap1. Modulando vie dipendenti da Rap1 che controllano l’attivazione delle integrine, la dinamica delle giunzioni cellula–cellula e il rimodellamento del citoscheletro di actina, Rap1GAP influenza adesione, migrazione e comportamento cellulare polarizzato. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di RAP1GAP sono state riportate in molteplici contesti patologici, in cui una segnalazione di Rap1 deregolata può perturbare le reti MAPK/ERK e PI3K e rimodellare le interazioni con la matrice extracellulare. In quanto “freno” di segnalazione all’interfaccia tra recettori di membrana e circuiti di GTPasi a valle, RAP1GAP è spesso studiato per chiarire i meccanismi di invasione, funzione di barriera e fenotipi di tipo metastatico in sistemi modello.
Rap1GAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAP1GAP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAP1GAP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAP1GAP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAP1GAP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.