PSS2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404133-ACT

Il gene umano **PTDSS2** codifica la **fosfatidilserina sintasi 2 (PSS2)**, un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza la produzione di fosfatidilserina tramite scambio di basi con la fosfatidiletanolammina. Controllando l’abbondanza cellulare di fosfatidilserina, PSS2 contribuisce a regolare la biogenesi delle membrane, l’omeostasi degli organelli, il traffico vescicolare e processi di segnalazione dipendenti dai lipidi che influenzano l’apoptosi e la rimozione fagocitica. L’attività di PTDSS2 è strettamente collegata alle vie di rimodellamento dei fosfolipidi e allo scambio di lipidi tra RE e mitocondri, plasmando la funzione mitocondriale e le risposte cellulari allo stress. La disregolazione del metabolismo della fosfatidilserina è stata associata a fenotipi di crescita e sopravvivenza alterati nel cancro e, più in generale, a difetti di membrana con rilevanza metabolica e neurobiologica, rendendo PTDSS2 un bersaglio utile per studi meccanicistici.

PSS2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTDSS2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSS2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTDSS2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTDSS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSS2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTDSS2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSS2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSS2 nelle cellule tumorali con espressione di PTDSS2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.