Psoriasin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418211-ACT

S100A7 codifica la psoriasina, una proteina della famiglia S100 legante il calcio, arricchita negli epiteli stratificati e indotta in condizioni di stress infiammatorio. La psoriasina contribuisce alla differenziazione epiteliale, alla difesa di barriera e alla segnalazione dell’immunità innata, e può agire come mediatore associato al danno che modella il reclutamento leucocitario e le reti locali di citochine. È collegata all’iperproliferazione dei cheratinociti e a programmi infiammatori caratteristici della psoriasi e di altri stati infiammatori epiteliali; inoltre, la sua disregolazione è stata riportata in molteplici contesti di carcinoma, dove è associata ad alterazioni della migrazione cellulare e delle interazioni tra tumore e microambiente. Queste proprietà rendono S100A7 un nodo utile per studiare il dialogo tra epitelio e sistema immunitario, i programmi trascrizionali responsivi allo stress e i processi di segnalazione calcio-dipendenti.

Psoriasin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di S100A7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Psoriasin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus S100A7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione S100A7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Psoriasin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus S100A7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Psoriasin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Psoriasin nelle cellule tumorali con espressione di S100A7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.