PSKH1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410963-ACT

PSKH1 (protein serine kinase H1) è una protein-chinasi Ser/Thr conservata, implicata nella regolazione della segnalazione cellulare e nel controllo delle funzioni proteiche dipendente dalla fosforilazione. È stata associata a processi quali la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione in risposta allo stress, attraverso la modulazione di reti guidate da chinasi che coordinano proliferazione e adattamento. È stato inoltre riportato che PSKH1 umano si localizza in compartimenti nucleari, in linea con possibili ruoli nel controllo di programmi di espressione genica e di vie associate al processamento dell’RNA. Alterazioni della segnalazione mediata da chinasi e cascate di fosforilazione deregolate sono frequentemente osservate in stati cellulari rilevanti per la malattia, rendendo PSKH1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul rimodellamento delle vie di segnalazione in fenotipi complessi.

PSKH1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSKH1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSKH1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSKH1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSKH1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSKH1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSKH1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSKH1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSKH1 nelle cellule tumorali con espressione di PSKH1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.