PRDM9 Plasmide Double Nickase (h): sc-412740-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PRDM9 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PRDM9 Double Nickase Plasmid (h) e il PRDM9 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRDM9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PRDM9 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412740-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRDM9 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412740-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDM9 codifica una metiltransferasi delle lisine istoniche specifica della meiosi e un fattore di legame al DNA che determina la localizzazione degli hotspot di ricombinazione riconoscendo specifici motivi di sequenza e depositando i segni H3K4me3 e H3K36me3. Attraverso i suoi domini KRAB, PR/SET e a dita di zinco, PRDM9 coordina il rimodellamento della cromatina e il reclutamento del macchinario della ricombinazione meiotica per avviare la formazione programmata di rotture a doppio filamento e il corretto appaiamento dei cromosomi omologhi. La variabilità degli array di dita di zinco di PRDM9 è un determinante principale dell’utilizzo degli hotspot e della distribuzione dei crossing-over, collegando la funzione di PRDM9 alla stabilità del genoma e alla biologia riproduttiva. Un’attività di PRDM9 deregolata o un’espressione ectopica è stata inoltre esplorata nel contesto di pattern epigenetici aberranti e riarrangiamenti genomici, rendendolo rilevante per studi sui processi mutazionali e sull’integrità della linea germinale.
PRDM9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRDM9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRDM9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRDM9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRDM9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.