PRDM1/Blimp-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419334-ACT

Il gene Prdm1 del topo codifica il repressore trascrizionale PRDM1/Blimp-1, un fattore contenente un dominio PR/SET che coordina i programmi di differenziamento terminale nelle linee cellulari immunitarie ed epiteliali. PRDM1 integra la segnalazione di citochine e dei recettori per l’antigene con il rimodellamento della cromatina per reprimere reti geniche proliferative, promuovendo al contempo stati trascrizionali specifici di linea, inclusi la maturazione delle plasmacellule e la differenziazione dei linfociti T effettrici. Modula vie legate al recettore delle cellule B e alle risposte guidate dall’interferone, e contribuisce a stabilire il silenziamento trascrizionale tramite interazioni con corepressori e regolatori epigenetici. Un’attività o un’espressione disregolata di PRDM1 è associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria ed è stata studiata nel contesto della biologia delle neoplasie linfoidi, della regolazione dell’infiammazione e di difetti di differenziamento in modelli di sviluppo e di tessuto.

PRDM1/Blimp-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Prdm1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRDM1/Blimp-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Prdm1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Prdm1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRDM1/Blimp-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Prdm1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRDM1/Blimp-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRDM1/Blimp-1 nelle cellule tumorali con espressione di Prdm1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.