PMS2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401600-NIC

PMS2 codifica un componente fondamentale della macchina di riparazione degli appaiamenti errati del DNA (MMR), formando con MLH1 l’eterodimero MutLα per coordinare il riconoscimento e la processamento dei mismatch base–base e dei loop di inserzione–delezione che insorgono durante la replicazione. Attraverso cambiamenti conformazionali guidati dall’attività ATPasica e l’attività endonucleasica, PMS2 contribuisce ad accoppiare l’identificazione del mismatch all’escissione, alla risintesi e alla ligazione, mantenendo così la stabilità del genoma e limitando la mutagenesi. La funzione di PMS2 si integra con la fedeltà della replicazione, la segnalazione dei checkpoint e le risposte cellulari al danno al DNA. L’alterazione o la disregolazione di PMS2 è associata a un aumento dell’instabilità dei microsatelliti e a fenotipi di ipermutazione, rilevanti per gli studi sulla predisposizione ereditaria al cancro e sui meccanismi di malattia legati alla riparazione del DNA.

PMS2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PMS2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PMS2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PMS2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PMS2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.