PMM2 Plasmide Double Nickase (m): sc-424790-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PMM2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PMM2 Double Nickase Plasmid (m) e il PMM2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pmm2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PMM2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424790-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PMM2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424790-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Pmm2 codifica la fosfomannomutasi 2 (PMM2), un enzima citosolico che interconverte mannoso-6-fosfato e mannoso-1-fosfato per sostenere la biosintesi del GDP-mannosio e degli oligosaccaridi legati al dolicolo. Questa attività collega Pmm2 alla N-glicosilazione e a processi più ampi di assemblaggio dei glicani che influenzano il ripiegamento proteico, il traffico intracellulare e le interazioni con la matrice extracellulare. L’alterazione della funzione di PMM2 compromette la proteostasi e i pattern di glicosilazione sulla superficie cellulare, con effetti sull’omeostasi della via secretoria e sulla segnalazione intercellulare. Pmm2 è quindi ampiamente studiato in modelli dei disordini congeniti della glicosilazione e in analisi a livello di sistema della regolazione, dipendente dai glicani, di sviluppo, immunità e metabolismo.
PMM2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pmm2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pmm2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pmm2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pmm2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.