Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plk Plasmide Double Nickase (m): sc-422309-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Plk Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Plk Double Nickase Plasmid (m) e il Plk Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Plk1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Plk Antibody (F-8): sc-17783
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Plk Plasmide Double Nickase (m) | sc-422309-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plk Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422309-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Plk1 codifica la polo-like chinasi 1 (Plk), una chinasi serina/treonina che coordina passaggi chiave della mitosi regolando la maturazione del centrosoma, l’assemblaggio del fuso bipolare, la segregazione dei cromosomi e la citocinesi. L’attività di Plk1 si integra con la segnalazione CDK1–ciclina B e controlla molteplici substrati mitotici, incluse proteine coinvolte nella funzione del cinetocore e nella dinamica dei microtubuli, per garantire una corretta progressione del ciclo cellulare. Un’espressione o un’attività deregolata di Plk1 è associata a proliferazione aberrante e instabilità del genoma, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato per studiare i checkpoint mitotici, l’instabilità cromosomica e le decisioni sul destino cellulare nelle cellule di mammifero in divisione.
Plk Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Plk1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Plk1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Plk1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Plk1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.