PLD6 Plasmide Double Nickase (h): sc-410373-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PLD6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PLD6 Double Nickase Plasmid (h) e il PLD6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PLD6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PLD6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410373-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **PLD6** codifica un’endonucleasi della famiglia della fosfolipasi D localizzata sulla membrana esterna mitocondriale, nota anche come **MitoPLD**, che genera acido fosfatidico a partire dalla cardiolipina, collegando il metabolismo lipidico alla dinamica mitocondriale. L’attività di PLD6 contribuisce alla fusione mitocondriale e all’architettura dei mitocondri e partecipa alle vie di biogenesi dei piccoli RNA nelle cellule germinali, attraverso ruoli nel processamento dei **piRNA** e nel silenziamento dei trasposoni. Influenzando il rimodellamento della membrana mitocondriale e i meccanismi di difesa del genoma, PLD6 è rilevante per studi sull’integrità della linea germinale, la meiosi e le risposte cellulari allo stress. La disregolazione di questi processi è stata associata a fenotipi riproduttivi e a difetti cellulari legati alla disfunzione mitocondriale, rendendo PLD6 un bersaglio di interesse per indagini meccanicistiche.
PLD6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PLD6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PLD6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PLD6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PLD6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.