PGS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-411287-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PGS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PGS1 Double Nickase Plasmid (h) e il PGS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PGS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PGS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-411287-NIC | 20 µg | $410.00 |
PGS1 codifica la fosfatidilglicerofosfato sintasi 1, un enzima della membrana interna mitocondriale che catalizza la fase impegnata della produzione di fosfatidilglicerolo, un precursore necessario per la biosintesi della cardiolipina. Attraverso il suo ruolo nella rete del rimodellamento della cardiolipina e dell’omeostasi dei fosfolipidi mitocondriali, PGS1 influenza l’efficienza della fosforilazione ossidativa, l’architettura delle creste e il controllo qualità mitocondriale responsivo allo stress. Un’alterazione dell’attività di PGS1 può modificare la composizione lipidica delle membrane e incidere sulla dinamica mitocondriale e sulle vie di segnalazione bioenergetica. Di conseguenza, PGS1 viene studiato nel contesto di fenotipi di disfunzione mitocondriale e di meccanismi patologici legati al metabolismo lipidico, in cui la disponibilità di cardiolipina è un determinante chiave delle prestazioni dell’organello.
PGS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PGS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PGS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PGS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PGS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.