PGF2αR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402974-ACT

PTGFR codifica il recettore della prostaglandina F2α (PGF2αR), un GPCR di tipo rodopsinico che lega la PGF2α per avviare una segnalazione dipendente da Gq/11, aumentando il calcio intracellulare e attivando la fosfolipasi C, la PKC e le vie MAPK a valle. Attraverso queste cascate, PGF2αR regola la contrattilità della muscolatura liscia, il tono vascolare e risposte infiammatorie dipendenti dal contesto, collegando la biologia dei prostanoidi ai programmi di rimodellamento tissutale. Alterazioni della segnalazione di PTGFR sono state studiate nella fisiologia riproduttiva, nella regolazione della pressione oculare e nei segnali del microambiente associato al cancro, dove la segnalazione guidata dalle prostaglandine può influenzare proliferazione, migrazione e dinamiche della matrice extracellulare. In quanto recettore di membrana che integra segnali derivati dagli eicosanoidi, PGF2αR rappresenta un nodo gestibile per interrogare gli output trascrizionali e fenotipici mediati dai GPCR.

PGF2αR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTGFR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PGF2αR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTGFR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTGFR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PGF2αR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTGFR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PGF2αR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PGF2αR nelle cellule tumorali con espressione di PTGFR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.