PASK Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416953-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PASK Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- PASK CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal PASK CRISPR Activation Plasmid (h) e dal PASK CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di PASK. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PASK Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-416953-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
PASK Plasmide di attivazione CRISPR (h2) | sc-416953-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
La chinasi serina/treonina contenente il dominio Per-Arnt-Sim (PAS), PASK (Per-Arnt-Sim domain-containing serine/threonine-protein kinase), agisce come una chinasi sensibile ai nutrienti e all’energia che collega i segnali metabolici all’espressione genica e alle decisioni sul destino cellulare. Nelle cellule umane, PASK integra segnali legati alla disponibilità di glucosio e alla funzione mitocondriale e modula programmi trascrizionali a valle coinvolti nel metabolismo di carboidrati e lipidi, incluse vie connesse alla differenziazione endocrina pancreatica e a processi responsivi all’insulina. L’attività di PASK è stata studiata nel contesto di reti di segnalazione adiacenti ad AMPK e mTOR, dove può influenzare l’equilibrio tra anabolismo e catabolismo e le risposte adattative allo stress. Un’espressione o una segnalazione di PASK deregolate sono state associate a fenotipi metabolici rilevanti per la ricerca su diabete e obesità, ed è stata inoltre esplorata per ruoli più ampi nella proliferazione e nell’adattamento cellulare.
PASK Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PASK senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
PASK Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PASK nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PASK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PASK. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PASK nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PASK nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PASK nelle cellule tumorali con espressione di PASK silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.