p8 Plasmide Double Nickase (h): sc-402153-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il p8 Double Nickase Plasmid (h) e il p8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NUPR1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402153-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p8 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402153-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NUPR1 (p8) è una piccola proteina nucleare inducibile dallo stress che agisce da regolatore trascrizionale, coordinando l’adattamento cellulare al danno e allo stress metabolico. Modula programmi di espressione genica associati alla cromatina coinvolti in autofagia, controllo del ciclo cellulare, risposte al danno al DNA e segnalazione infiammatoria, con interazioni riportate con vie quali p53, NF-κB e TGF-β. Un’attività alterata di NUPR1 è stata associata a cambiamenti nella proliferazione, nella suscettibilità all’apoptosi, nella plasticità epitelio–mesenchimale e nell’omeostasi redox in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi la biologia del cancro e modelli di danno tissutale. Queste proprietà rendono NUPR1 un bersaglio utile per analizzare i circuiti di risposta allo stress e i meccanismi di riprogrammazione trascrizionale nelle cellule umane.
p8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NUPR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NUPR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NUPR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NUPR1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.