OX2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421696-NIC

Il gene murino **Cd200** codifica la glicoproteina di membrana **OX2 (CD200)**, appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, un ligando inibitorio chiave per **CD200R** espresso sulle cellule mieloidi. L’attivazione di CD200R attenua l’attivazione di macrofagi e microglia riducendo la segnalazione pro-infiammatoria e modulando la produzione di citochine, contribuendo all’omeostasi immunitaria nelle interfacce tissutali. Questo asse influenza la funzione delle cellule presentanti l’antigene, l’infiltrazione leucocitaria e la risoluzione dell’infiammazione, ed è spesso studiato in contesti quali neuroinfiammazione, evasione immunitaria tumorale e patologie di tipo autoimmunitario. Le dinamiche di espressione di Cd200/OX2 vengono inoltre utilizzate per indagare una regolazione di tipo “checkpoint immunitario” nel sistema nervoso centrale e negli organi periferici.

OX2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cd200 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cd200. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cd200. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cd200 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.