OSR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406034-ACT

OSR1 umano (odd-skipped related transcription factor 1) codifica una proteina a dita di zinco legante il DNA che regola le decisioni sul destino cellulare e i programmi di patterning durante lo sviluppo embrionale, con ruoli di primo piano nella specificazione del mesoderma intermedio e nell’organogenesi. OSR1 agisce come regolatore trascrizionale che si integra con reti geniche guidate da morfogeni, incluse vie influenzate dalla segnalazione WNT e BMP, per controllare differenziamento, migrazione e morfogenesi tissutale. Un’alterata espressione di OSR1 è stata associata ad anomalie dello sviluppo e a programmi di linea cellulare deregolati in contesti rilevanti per la malattia, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dell’identità cellulare. In vitro, OSR1 viene comunemente studiato in modelli di differenziamento epiteliale e di sviluppo di organoidi, in cui il dosaggio del fattore di trascrizione può rimodellare i circuiti regolatori.

OSR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OSR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OSR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OSR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OSR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OSR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OSR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OSR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OSR1 nelle cellule tumorali con espressione di OSR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.