ORMDL3 Plasmide Double Nickase (h): sc-403587-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ORMDL3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ORMDL3 Double Nickase Plasmid (h) e il ORMDL3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ORMDL3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ORMDL3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ORMDL3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ORMDL3 (orosomucoid-like 3) è una proteina di membrana del reticolo endoplasmatico che regola la biosintesi degli sfingolipidi modulando l’attività della serina palmitoiltransferasi, influenzando così l’omeostasi delle ceramidi e la segnalazione mediata dai lipidi. Attraverso il suo ruolo nel metabolismo lipidico del RE, ORMDL3 incide sulle risposte allo stress del RE, sulla gestione del calcio e sulle vie di segnalazione infiammatorie che determinano gli stati di attivazione cellulare. Alterazioni dell’espressione di ORMDL3 e i conseguenti squilibri lipidici sono state associate a disregolazione immunitaria e a fenotipi di infiammazione delle vie aeree, rendendolo un bersaglio frequente negli studi sulla suscettibilità all’asma e su tratti infiammatori correlati. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di ORMDL3 offre un modo per analizzare come il flusso degli sfingolipidi si intersechi con i programmi guidati dalle citochine, con la composizione di membrana e con le vie adattative allo stress.
ORMDL3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ORMDL3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ORMDL3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ORMDL3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ORMDL3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.