OR6K3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-415915-ACT

OR6K3 codifica un recettore olfattivo appartenente alla famiglia dei GPCR di classe A di tipo rodopsina, un ampio gruppo di recettori che collega il riconoscimento dei ligandi alla segnalazione mediata da proteine G eterotrimeriche. Sebbene siano noti soprattutto per il ruolo nella rilevazione degli odoranti, i recettori olfattivi possono essere espressi anche in tessuti non olfattivi, dove possono influenzare la dinamica dei secondi messaggeri intracellulari, inclusi la cAMP e la segnalazione calcio-dipendente. Le vie guidate dai GPCR si intersecano con programmi trascrizionali che controllano lo stato cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress, rendendo OR6K3 un bersaglio utile per esplorare le reti di segnalazione mediate dai recettori. Sono stati riportati pattern di espressione alterati di recettori olfattivi ectopici in diversi contesti biologici, a sostegno dell’indagine di OR6K3 come marcatore molecolare e modulatore di vie di segnalazione in modelli rilevanti per la patologia umana.

OR6K3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OR6K3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OR6K3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OR6K3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OR6K3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OR6K3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OR6K3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OR6K3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OR6K3 nelle cellule tumorali con espressione di OR6K3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.