OPN1MW Plasmide Double Nickase (h): sc-416637-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- OPN1MW Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il OPN1MW Double Nickase Plasmid (h) e il OPN1MW Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira OPN1MW. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
OPN1MW Plasmide Double Nickase (h) | sc-416637-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OPN1MW Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416637-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPN1MW codifica l’opsina sensibile alle lunghezze d’onda medie (M-opsina), un recettore accoppiato a proteine G dei fotorecettori a cono che lega l’11-cis-retinale e avvia la fototrasduzione in risposta alla luce verde. Una volta attivata, coinvolge la cascata di segnalazione transducina dei coni (GNAT2)–PDE6, riducendo i livelli di cGMP e regolando l’attività dei canali ionici attivati dal cGMP per controllare il potenziale di membrana e l’output sinaptico nei coni retinici. Una corretta espressione e localizzazione di OPN1MW sostiene la struttura del segmento esterno dei coni e la discriminazione dei colori, collegandolo a processi fondamentali della segnalazione visiva e della fisiologia retinica. Le varianti genetiche o la disregolazione di OPN1MW sono associate a deficit ereditari della visione dei colori e a fenotipi correlati della funzione dei coni, rendendolo rilevante per studi sullo sviluppo della retina, sul traffico delle opsine e sull’integrità delle reti di fototrasduzione.
OPN1MW Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus OPN1MW nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di OPN1MW. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di OPN1MW. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con OPN1MW interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.