OLFM2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-434096-ACT

Il gene murino **Olfm2** codifica l’olfactomedina 2 (OLFM2), una glicoproteina secreta/associata alla matrice extracellulare (ECM) implicata nella regolazione delle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice che modellano l’organizzazione dei tessuti e la connettività neuronale. OLFM2 è collegata al rimodellamento della matrice extracellulare e a processi di segnalazione che influenzano adesione, migrazione e differenziamento cellulare, con una rilevante importanza per la neurobiologia dello sviluppo e delle sinapsi. Studi di espressione e funzionali collocano OLFM2 in vie che governano la crescita dei neuriti e la maturazione dei circuiti, in cui alterazioni dei segnali extracellulari possono incidere su eccitabilità e plasticità. Un’attività disregolata di OLFM2 è stata studiata nel contesto di fenotipi del sistema nervoso e di meccanismi di malattia più ampi che coinvolgono cambiamenti del microambiente extracellulare, a supporto della sua utilità come bersaglio meccanicistico nella genomica funzionale.

OLFM2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Olfm2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OLFM2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Olfm2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Olfm2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OLFM2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Olfm2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OLFM2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OLFM2 nelle cellule tumorali con espressione di Olfm2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.