OFD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-410551-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- OFD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il OFD1 Double Nickase Plasmid (h) e il OFD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira OFD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
OFD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410551-NIC | 20 µg | $410.00 |
OFD1 codifica una proteina del centrosoma e del corpo basale, necessaria per la biogenesi e il mantenimento del ciglio primario; in questo contesto sostiene l’organizzazione dell’assonema e regola la composizione dei satelliti centriolari. Attraverso queste funzioni, OFD1 influenza vie di segnalazione dipendenti dalla ciliogenesi, tra cui Hedgehog e Wnt, oltre alla progressione del ciclo cellulare e al traffico polarizzato. L’alterazione di OFD1 compromette la struttura del ciglio e l’accuratezza della segnalazione, collegandola a fenotipi associati alle ciliopatie, come anomalie cranio-facciali e scheletriche, coinvolgimento renale e difetti del neurosviluppo. In quanto regolatore di ciglia e centrosoma, OFD1 è ampiamente studiata in modelli di organogenesi, polarità cellulare e risposte allo stress associate a dinamiche ciliari difettose.
OFD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus OFD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di OFD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di OFD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con OFD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.