Ob Plasmide Double Nickase (h): sc-400706-NIC

Il gene umano **LEP** codifica la leptina (Ob), un’adipochina secreta che trasmette lo stato nutrizionale ai tessuti periferici e al sistema nervoso centrale per regolare appetito, dispendio energetico e funzione neuroendocrina. La trasduzione del segnale della leptina è mediata principalmente da cascate **JAK2/STAT3**, **PI3K–AKT** e **MAPK** dipendenti da **LEPR**, integrandosi con le vie dell’insulina e dell’infiammazione per coordinare l’omeostasi metabolica. Un’espressione o una segnalazione di **LEP** disregolate sono associate a modifiche dell’adiposità, della sensibilità all’insulina e della modulazione immunitaria, e sono ampiamente studiate nel contesto dei fenotipi cardiometabolici legati all’obesità. **LEP/Ob** influenza inoltre l’ematopoiesi, la polarizzazione dei linfociti T e le reti citochiniche, sostenendo gli studi su immunometabolismo e infiammazione sistemica.

Ob Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LEP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LEP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LEP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LEP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.