NQO1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400326-ACT

NQO1 umano (NAD(P)H quinone dehydrogenase 1) è una flavoproteina citosolica che catalizza la riduzione a due elettroni dei chinoni a idrochinoni, limitando il redox cycling e la produzione di specie reattive dell’ossigeno. Agisce come componente chiave dei programmi cellulari di detossificazione e di difesa antiossidante, intersecandosi con il metabolismo degli xenobiotici e con le risposte allo stress ossidativo regolate da NRF2/KEAP1. Modulando il tono redox cellulare e il metabolismo dei chinoni, NQO1 influenza la stabilità delle proteine e la segnalazione adattativa allo stress che determina proliferazione e sopravvivenza in condizioni di sfida elettrofila o ossidativa. Alterazioni dell’espressione e dell’attività di NQO1 sono state associate a una variabilità nella sensibilità a sostanze chimiche e a squilibri redox osservati in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi la biologia del cancro e modelli di stress infiammatorio.

NQO1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NQO1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NQO1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NQO1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NQO1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NQO1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NQO1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NQO1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NQO1 nelle cellule tumorali con espressione di NQO1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.