Nova-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404452-ACT

Il gene umano **NOVA2** codifica Nova-2, una proteina legante l’RNA arricchita nei neuroni che riconosce i motivi YCAY per regolare lo splicing alternativo e altri eventi di processamento post-trascrizionale dell’RNA. Nova-2 modella la differenziazione neuronale e la funzione sinaptica coordinando l’inclusione e l’esclusione degli esoni in reti di trascritti coinvolti nella crescita dei neuriti, nella dinamica del citoscheletro e nella neurotrasmissione. Attraverso questi programmi di splicing, NOVA2 contribuisce al mantenimento dell’integrità dei circuiti neurali e alla regolazione genica dipendente dall’attività. La disregolazione o varianti patogene di NOVA2 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e a disfunzioni neurologiche, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici del processamento dell’RNA nel sistema nervoso.

Nova-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NOVA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nova-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NOVA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NOVA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nova-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NOVA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nova-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nova-2 nelle cellule tumorali con espressione di NOVA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.