Nir3 Plasmide Double Nickase (m): sc-422631-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nir3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nir3 Double Nickase Plasmid (m) e il Nir3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pitpnm2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nir3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422631-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nir3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422631-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pitpnm2 codifica Nir3, una proteina di trasferimento del fosfatidilinositolo che contribuisce a regolare la disponibilità dei fosfoinositidi nei siti di contatto tra reticolo endoplasmatico e membrana plasmatica. Nir3 partecipa al turnover dei fosfoinositidi sostenendo il ripristino di PI(4,5)P2 in seguito alla segnalazione mediata dalla fosfolipasi C, influenzando così le risposte recettoriali accoppiate al Ca2+, il traffico di membrana e la dinamica del citoscheletro. Attraverso queste funzioni, Nir3 contribuisce all’omeostasi della segnalazione lipidica, rilevante per la fisiologia neuronale e per processi più ampi che coinvolgono la segnalazione guidata dai recettori e il rimodellamento delle membrane. Un controllo alterato del metabolismo dei fosfoinositidi è implicato in molteplici contesti di stress e disfunzione cellulare, motivo per cui sono incoraggiati studi meccanicistici sul trasferimento lipidico dipendente da Nir3 e sull’adattamento della segnalazione.
Nir3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pitpnm2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pitpnm2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pitpnm2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pitpnm2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.