NGFR p75 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400552-ACT

NGFR (p75NTR) codifica il recettore delle neurotrofine a bassa affinità NGFR p75, un membro della superfamiglia dei recettori TNF che lega NGF e altre neurotrofine per modulare, in modo dipendente dal contesto, la sopravvivenza neuronale, la differenziazione e l’apoptosi. NGFR p75 coopera con i recettori Trk e con sortilina per influenzare la specificità del ligando e regolare la segnalazione a valle attraverso vie dipendenti da NF-κB, JNK/c-Jun, RhoA e ceramide, che modellano la crescita assonale, il rimodellamento sinaptico e le risposte allo stress. Nei tessuti umani, l’espressione di NGFR contraddistingue i lignaggi derivati dalla cresta neurale e le risposte dinamiche al danno; inoltre, un’alterata segnalazione di p75NTR è stata associata a neurodegenerazione, a meccanismi del dolore neuropatico e alla plasticità delle cellule tumorali in diversi tipi di cancro. Queste proprietà rendono NGFR un utile strumento molecolare per studiare il crosstalk delle vie delle neurotrofine, le transizioni del destino cellulare e le soglie di segnalazione che determinano l’equilibrio tra apoptosi e sopravvivenza.

NGFR p75 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NGFR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NGFR p75 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NGFR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NGFR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NGFR p75. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NGFR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NGFR p75 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NGFR p75 nelle cellule tumorali con espressione di NGFR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.