Neurogranin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404119-ACT

Il gene umano **NRGN** codifica la neurogranina, una proteina postsinaptica legante la calmodulina, arricchita nelle spine dendritiche, che modula la disponibilità di Ca2+/calmodulina e sostiene la segnalazione sinaptica dipendente dall’attività. Regolando le dinamiche di fosforilazione dipendenti da CaMKII e i programmi di plasticità a valle, la neurogranina contribuisce al potenziamento a lungo termine, al rimodellamento delle spine e alla maturazione dei circuiti neuronali. L’espressione di NRGN e lo stato di fosforilazione della neurogranina sono collegati alla trasmissione glutamatergica e a vie più ampie che governano apprendimento e memoria, incluse le risposte trascrizionali regolate da CREB. La disregolazione della biologia della neurogranina è stata associata a fenotipi rilevanti per malattie neuropsichiatriche e neurodegenerative, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici della disfunzione sinaptica.

Neurogranin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NRGN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Neurogranin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NRGN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NRGN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Neurogranin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NRGN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Neurogranin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Neurogranin nelle cellule tumorali con espressione di NRGN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.