NEDL2 Plasmide Double Nickase (m): sc-435931-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NEDL2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NEDL2 Double Nickase Plasmid (m) e il NEDL2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Hecw2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NEDL2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-435931-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NEDL2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-435931-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Hecw2 codifica NEDL2, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT che media l’ubiquitinazione dei substrati per controllare la stabilità proteica e l’output di segnalazione. L’attività di NEDL2 contribuisce alla proteostasi e alla regolazione di processi cellulari quali lo sviluppo neuronale, la funzione sinaptica e le vie responsiva allo stress, attraverso la degradazione mirata di proteine regolatorie. In modelli murini e negli studi di genetica umana, HECW2/NEDL2 è stato associato a fenotipi neuroevolutivi, inclusi un’alterata maturazione neuronale e difetti di segnalazione, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della biologia del sistema nervoso. In quanto ligasi E3, NEDL2 rappresenta un nodo utile per indagare il controllo ubiquitino-dipendente della dinamica delle vie di segnalazione e delle transizioni di stato cellulare.
NEDL2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hecw2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hecw2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hecw2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hecw2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.