Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NBK Plasmide Double Nickase (h): sc-401751-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NBK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NBK Double Nickase Plasmid (h) e il NBK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BIK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NBK Antibody (H-1): sc-365625
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NBK Plasmide Double Nickase (h) | sc-401751-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NBK Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401751-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BIK codifica NBK, un membro pro-apoptotico “BH3-only” della famiglia BCL-2 che promuove la permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale antagonizzando proteine anti-apoptotiche quali BCL-2, BCL-XL e MCL1. NBK agisce all’interfaccia tra l’apoptosi intrinseca, la segnalazione di stress del reticolo endoplasmatico (ER) e l’omeostasi del calcio, collegando segnali di stress all’attivazione delle caspasi e alla morte cellulare programmata. La regolazione dell’espressione e del turnover di BIK contribuisce alla sensibilità cellulare al danno al DNA, alla privazione di fattori di crescita e allo stress proteotossico, rendendolo rilevante per studi sulla sopravvivenza delle cellule tumorali e sull’adattamento allo stress. Un’attività alterata di BIK/NBK è stata inoltre associata all’omeostasi delle cellule immunitarie e a contesti di rimodellamento tissutale in cui le soglie apoptotiche plasmano i fenotipi di malattia.
NBK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BIK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BIK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BIK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BIK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.