Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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N-SMase2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401937-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- N-SMase2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il N-SMase2 Double Nickase Plasmid (h) e il N-SMase2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SMPD3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: N-SMase2 Antibody (G-6): sc-166637
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
N-SMase2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401937-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
N-SMase2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401937-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’SMPD3 umano codifica la sfingomielinasi neutra 2 (N‑SMase2), un enzima associato alla membrana che idrolizza la sfingomielina generando ceramide e fosfocolina. Controllando la produzione di ceramide a livello della membrana plasmatica e del Golgi, N‑SMase2 regola il metabolismo degli sfingolipidi, l’organizzazione dei microdomini di membrana e la trasduzione del segnale a valle di stimoli di stress cellulare e infiammatori. L’attività di SMPD3 è stata collegata a vie che influenzano l’apoptosi, il traffico vescicolare e la biogenesi delle vescicole extracellulari, con effetti a valle sull’omeostasi lipidica e sulla regolazione dello stato cellulare. Una segnalazione della ceramide deregolata e un’alterata funzione di SMPD3/N‑SMase2 sono implicate in processi rilevanti per la malattia, inclusi neurobiologia, disfunzione metabolica, infiammazione e fenotipi associati al cancro.
N-SMase2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMPD3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMPD3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMPD3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMPD3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.