MYT1L Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421811-ACT

Il gene murino *Myt1l* codifica MYT1L, un fattore di trascrizione della linea neurale con domini di legame al DNA a dita di zinco C2HC, che contribuisce a consolidare l’identità neuronale e a regolare le reti geniche durante la neurogenesi e la maturazione. MYT1L agisce principalmente come repressore trascrizionale nei neuroni in differenziamento, modellando programmi coinvolti nella specificazione dei sottotipi neuronali, nello sviluppo sinaptico e nel mantenimento degli stati neuronali post-mitotici. Alterazioni del dosaggio o della funzione di MYT1L sono associate a fenotipi del neurosviluppo, inclusi disabilità intellettiva e tratti correlati ai disturbi dello spettro autistico, rendendolo un nodo importante per lo studio dei meccanismi di regolazione genica nel sistema nervoso in sviluppo e in quello adulto. Nei modelli cellulari, il controllo trascrizionale dipendente da MYT1L si interseca con la regolazione della cromatina e con vie di segnalazione responsive all’attività neuronale che influenzano la formazione dei circuiti e la plasticità.

MYT1L Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Myt1l senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYT1L Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Myt1l nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Myt1l, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYT1L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Myt1l nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYT1L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYT1L nelle cellule tumorali con espressione di Myt1l silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.