MYL3 Plasmide Double Nickase (m): sc-421787-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MYL3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MYL3 Double Nickase Plasmid (m) e il MYL3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Myl3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MYL3 Antibody (MLM527): sc-58804
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MYL3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MYL3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Myl3 codifica la catena leggera della miosina 3 (MYL3), un componente regolatorio essenziale della miosina del muscolo striato che stabilizza il braccio di leva e modula il ciclo dei ponti trasversali actina–miosina durante la contrazione. Nel muscolo cardiaco e nel muscolo scheletrico a contrazione lenta del topo, MYL3 contribuisce all’assemblaggio del sarcomero, alla cinetica contrattile e alla meccano-trasduzione in vie che collegano la gestione del calcio, l’organizzazione miofibrillare e la richiesta energetica. Alterazioni dei livelli o della sequenza di MYL3 modificano le prestazioni sarcomeriche e sono state associate a fenotipi legati alla cardiomiopatia e a disfunzioni miofibrillari più ampie. Di conseguenza, Myl3 è ampiamente utilizzato negli studi sullo sviluppo muscolare, sulla contrattilità e sulle relazioni genotipo-fenotipo nei modelli di malattie del muscolo striato.
MYL3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Myl3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Myl3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Myl3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Myl3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.