MYH8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400346-ACT

MYH8 codifica la catena pesante della miosina 8, una proteina motoria sarcomerica che alimenta la contrattilità dipendente dall’actina e contribuisce alla formazione dei filamenti spessi nel muscolo striato. Come parte del complesso della miosina II, MYH8 supporta la generazione di forza dipendente dall’ATP e influenza l’organizzazione delle miofibrille, la maturazione delle fibre muscolari e la dinamica del citoscheletro. L’espressione di MYH8 è regolata durante lo sviluppo ed è spesso arricchita in contesti di muscolo scheletrico specializzato o in via di sviluppo, rendendola rilevante per gli studi sulla miogenesi e sulla plasticità muscolare. Un’alterata regolazione o varianti che compromettono la funzione motoria della miosina sono state associate a miopatie congenite e a fenotipi correlati all’artrogriposi distale, collegando MYH8 ai meccanismi delle malattie neuromuscolari.

MYH8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYH8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYH8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYH8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYH8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYH8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYH8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYH8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYH8 nelle cellule tumorali con espressione di MYH8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.