MYEOV2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409378-ACT

COPS9 (nota anche come MYEOV2) codifica un componente associato al signalosoma COP9, un regolatore conservato delle ubiquitina ligasi cullin-RING che modula il turnover proteico attraverso la deneddilazione e le vie ubiquitina–proteasoma. Controllando la degradazione dipendente dall’ubiquitina, i processi legati a COPS9/MYEOV2 influenzano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e programmi di trasduzione del segnale, incluse le reti associate a MAPK e NF-κB. La disregolazione dell’attività del signalosoma COP9 è stata collegata ad alterazioni della proteostasi e a un rimodellamento trascrizionale osservati in molteplici contesti tumorali, a supporto dell’interesse nello studio di COPS9/MYEOV2 in relazione a fenotipi di proliferazione e adattamento allo stress. Queste funzioni lo rendono un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione mediata dall’ubiquitina e sul crosstalk tra vie di segnalazione nelle cellule umane.

MYEOV2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COPS9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYEOV2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COPS9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COPS9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYEOV2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COPS9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYEOV2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYEOV2 nelle cellule tumorali con espressione di COPS9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.