MyD88 Plasmide Double Nickase (m): sc-421774-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MyD88 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MyD88 Double Nickase Plasmid (m) e il MyD88 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Myd88. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MyD88 Antibody (E-11): sc-74532
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MyD88 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421774-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MyD88 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421774-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Myd88 del topo codifica la proteina 88 della risposta primaria di differenziazione mieloide (MyD88), un adattatore essenziale per la maggior parte dei recettori Toll-like e dei membri della famiglia dei recettori dell’interleuchina-1, che collega l’attivazione del recettore alla segnalazione IRAK–TRAF6, all’attivazione di NF-κB e all’espressione di geni infiammatori guidata dalle MAPK. La segnalazione dipendente da MyD88 coordina l’attivazione delle cellule dell’immunità innata, la produzione di citochine e le risposte antimicrobiche, plasmando al contempo l’immunità adattativa a valle. Le vie di MyD88 deregolate sono ampiamente utilizzate per modellare una segnalazione infiammatoria aberrante nella biologia delle infezioni e nei meccanismi delle malattie infiammatorie, e per studiare come i segnali dell’immunità innata influenzino l’omeostasi tissutale e le interazioni tra tumore e sistema immunitario.
MyD88 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Myd88 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Myd88. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Myd88. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Myd88 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.