Plásmido Doble Nickase (m) MyD88: sc-421774-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)MyD88 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MyD88 (m) y el plásmido de doble nickasa MyD88 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Myd88. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MyD88 Anticuerpo (E-11): sc-74532
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) MyD88 | sc-421774-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) MyD88 | sc-421774-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen **Myd88** de ratón codifica la proteína de respuesta primaria a la diferenciación mieloide 88 (**MyD88**), un adaptador esencial para la mayoría de los receptores tipo Toll y los miembros de la familia de receptores de interleucina‑1, que acopla la activación del receptor a la señalización **IRAK–TRAF6**, la activación de **NF‑κB** y la expresión de genes inflamatorios impulsada por **MAPK**. La señalización dependiente de MyD88 coordina la activación de las células inmunitarias innatas, la producción de citocinas y las respuestas antimicrobianas, a la vez que modela la inmunidad adaptativa posterior. Las vías de MyD88 desreguladas se utilizan ampliamente para modelar señales inflamatorias aberrantes en biología de infecciones y mecanismos de enfermedades inflamatorias, y para estudiar cómo las señales de la inmunidad innata influyen en la homeostasis tisular y en las interacciones tumor–sistema inmunitario.
MyD88 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Myd88 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Myd88. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Myd88. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Myd88 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.