MSH2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400966-LAC

MSH2 codifica un fattore centrale della riparazione degli appaiamenti errati del DNA (MMR) che forma eterodimeri con MSH6 (MutSα) o MSH3 (MutSβ) per riconoscere i mismatch base–base e i loop di inserzione/delezione che insorgono durante la replicazione. Dopo il riconoscimento della lesione, i complessi contenenti MSH2 coordinano gli eventi di riparazione a valle con MLH1/PMS2 e con fattori associati alla replicazione, al fine di preservare la stabilità del genoma e limitare la mutagenesi. L’alterazione della MMR dipendente da MSH2 promuove l’instabilità dei microsatelliti e un aumento del carico mutazionale, collegando la disfunzione di MSH2 alla biologia dei tumori ereditari e sporadici. MSH2 è inoltre implicato nelle risposte cellulari ad alcuni agenti che danneggiano il DNA e allo stress replicativo, rendendolo un nodo utile per studiare l’interazione tra vie di riparazione del DNA.

Le particelle di attivazione lentivirale MSH2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MSH2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MSH2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MSH2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MSH2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MSH2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.