MOZ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403564-ACT

Il gene umano KAT6A codifica la lisina acetiltransferasi MOZ, un’acetiltransferasi degli istoni della famiglia MYST che acetila H3/H4 e funge da co-regolatore trascrizionale in corrispondenza di enhancer e promotori. MOZ si integra con il rimodellamento della cromatina e con la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II per controllare programmi di destino cellulare, inclusi la differenziazione ematopoietica e il mantenimento di cellule staminali/progenitrici. Attraverso i suoi ruoli nella regolazione epigenetica, KAT6A influenza vie che governano la proliferazione, le risposte al danno del DNA e l’espressione genica specifica di linea. La disregolazione dell’attività di KAT6A/MOZ, inclusi eventi di fusione oncogenica e alterazioni dell’espressione, è stata implicata nelle neoplasie ematologiche e in una più ampia instabilità trascrizionale/epigenomica rilevante per la ricerca in biologia del cancro.

MOZ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KAT6A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MOZ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KAT6A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KAT6A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MOZ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KAT6A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MOZ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MOZ nelle cellule tumorali con espressione di KAT6A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.