MMAB Plasmide Double Nickase (h): sc-409091-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MMAB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MMAB Double Nickase Plasmid (h) e il MMAB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MMAB. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MMAB Antibody (G-3): sc-271424
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MMAB Plasmide Double Nickase (h) | sc-409091-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MMAB Plasmide Double Nickase (h2) | sc-409091-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MMAB codifica un’adenosiltransferasi necessaria per il metabolismo intracellulare della vitamina B12 (cobalamina), catalizzando la conversione della cobalamina in adenosilcobalamina, il cofattore essenziale per la metilmalonil-CoA mutasi nel catabolismo mitocondriale del propionato. Attraverso questa via, MMAB sostiene un flusso efficiente da metilmalonil-CoA a succinil-CoA, collegando la degradazione degli amminoacidi e degli acidi grassi a catena dispari al ciclo dell’acido tricarbossilico. La perdita di funzione di MMAB compromette il metabolismo mitocondriale dipendente dalla cobalamina ed è associata all’acidemia metilmalonica e ad altri errori congeniti del metabolismo caratterizzati dall’accumulo di metilmalonato. MMAB rappresenta quindi un nodo chiave per studiare la biogenesi dei cofattori mitocondriali, le risposte allo stress metabolico e le relazioni genotipo–fenotipo nei difetti della via della cobalamina.
MMAB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MMAB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MMAB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MMAB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MMAB interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.