MANEA Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-413213-LAC

Il gene umano **MANEA** codifica l’endo-α-mannosidasi, una glicosidasi localizzata nell’apparato di Golgi che consente una via alternativa di maturazione delle glicoproteine N-glicosilate, rimuovendo residui da N-glicani ad alto contenuto di mannoso glucosilati. Questa attività si integra con il controllo di qualità del reticolo endoplasmatico (RE) e con l’elaborazione a valle lungo la via secretoria, coordinando il rimodellamento dei glicani che influenza il ripiegamento, il traffico e la stabilità delle proteine. Attraverso il suo ruolo nell’omeostasi delle glicoproteine, MANEA incide sulle reti cellulari di proteostasi e può modulare la gestione di recettori ed enzimi glicosilati. Alterazioni delle vie di N-glicosilazione sono state associate a disordini congeniti della glicosilazione e a fenotipi patologicamente rilevanti più ampi, che coinvolgono misfolding proteico e risposte allo stress, rendendo MANEA un nodo utile per studi meccanicistici.

Le particelle di attivazione lentivirale MANEA (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MANEA in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MANEA (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MANEA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MANEA. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MANEA e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.