Plásmido Doble Nickase (h) Lyn: sc-400463-NIC

El LYN humano codifica Lyn, una tirosina quinasa no receptora de la familia Src que acopla la señalización de los inmunorreceptores y de los receptores de citocinas a vías downstream que controlan la proliferación, la supervivencia, la adhesión y la remodelación del citoesqueleto. Lyn fosforila proteínas adaptadoras que contienen ITAM y modula la señalización a través de redes del receptor de células B, del receptor Fc y de las integrinas, convergiendo con las cascadas PI3K–AKT, MAPK y NF-κB. En linajes hematopoyéticos, Lyn también participa en el control por retroalimentación de los umbrales de activación mediante receptores inhibidores y fosfatasas, moldeando las respuestas inmunitarias innatas y adaptativas. La actividad o expresión desregulada de LYN se ha asociado con señalización inflamatoria aberrante y con una señalización de crecimiento alterada en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en investigación de inmunología y biología del cáncer.

Lyn El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LYN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LYN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LYN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LYN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.