Lyn Plasmide Double Nickase (h): sc-400463-NIC

Il gene umano **LYN** codifica Lyn, una tirosin-chinasi non recettoriale della famiglia Src che collega la segnalazione dei recettori immunitari e dei recettori per le citochine a vie a valle che controllano proliferazione, sopravvivenza, adesione e rimodellamento del citoscheletro. Lyn fosforila proteine adattatrici contenenti ITAM e modula la segnalazione attraverso le reti del recettore delle cellule B, del recettore Fc e delle integrine, intersecando le cascate PI3K–AKT, MAPK e NF-κB. Nelle linee ematopoietiche, Lyn partecipa anche al controllo a feedback delle soglie di attivazione tramite recettori inibitori e fosfatasi, plasmando le risposte immunitarie innate e adattative. Un'attività o un'espressione deregolata di **LYN** è stata associata a una segnalazione infiammatoria aberrante e ad alterazioni della segnalazione della crescita in molteplici contesti patologici, supportandone l'uso come nodo meccanicistico nella ricerca in immunologia e biologia dei tumori.

Lyn Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LYN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LYN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LYN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LYN interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.